VOLUMEN I

370. ENSAYOS DE ESTERILIDAD
El siguiente ensayo se emplea para verificar la
ausencia de contaminación por microorganismos
en productos esterilizados o preparados
asépticamente. Durante el desarrollo del ensayo,
el área de trabajo no debe estar expuesta a la luz
ultravioleta directa ni sometida a otros agentes
esterilizantes. Deben realizarse monitoreos
microbiológicos del área durante los ensayos.
La ausencia de contaminación microbiana,
evidenciada por este procedimiento, confirma que
el producto cumple con los requisitos del ensayo
aunque el mismo no es suficiente para suponer la
total esterilidad del lote ensayado, dadas las
limitaciones inherentes a la estadística del
muestreo.
MEDIOS DE CULTIVO
Los medios de cultivo se preparan de acuerdo
a las siguientes fórmulas. También se pueden
emplear fórmulas deshidratadas que luego de
reconstituidas cumplan con el Ensayo de
promoción del crecimiento.
Medio Tioglicolato
(Para incubación en condiciones aeróbicas)
L-Cistina…………………………… 0,5 g
Agar (con menos de 15 %
de humedad)………………………. 0,75 g
Cloruro de sodio…………………… 2,5 g
Glucosa Monohidrato……………… 5,5 g
Extracto de levadura
(soluble en agua)………………….. 5,0 g
Digerido pancreático de caseína…... 15,0 g
Tioglicolato de sodio*……………... 0,5 g g
Solución de resazurina sódica
(0,1 %), recién preparada………….. 1,0 ml
Agua c.s.p…………………………. 1.000 ml
pH después de la esterilización: 7,1 0,2
Mezclar y calentar hasta disolución completa.
Ajustar el pH del medio con hidróxido de sodio
1 N para obtener, después de la esterilización, un
pH de 7,1 ± 0,2. Filtrar en caliente, si fuera
necesario, a través de un papel de filtro
humedecido. Distribuir el medio en recipientes de
vidrio que mantenga una relación entre la
superficie expuesta y la profundidad de medio tal
que no más de la mitad superior experimente un
cambio de color, indicativo de la fijación de
oxígeno, al final del período de incubación. Tapar
para evitar la contaminación y la evaporación
excesiva del medio durante el almacenamiento.
Esterilizar en autoclave empleando un
procedimiento validado. Enfriar inmediatamente
a 25 °C. Si más del tercio superior ha tomado una
coloración rosada, el medio podrá regenerarse una
sola vez, calentando los recipientes en un baño de
agua o con vapor fluente, hasta que desaparezca el
color. Cuando el medio está listo para emplear,
no más del décimo superior debe tener un colorrosado.
*En caso de reemplazarse por Ácido
tioglicólico emplear 0,3 ml.
Caldo Tioglicolato Alternativo
(Para incubación en condiciones anaeróbicas)
L-cisteína………………………........ 0,5 g
Cloruro de sodio……………………. 2,5 g
Glucosa Monohidrato………………. 5,5 g
Extracto de levadura
(soluble en agua)………………........ 5,0 g
Digerido pancreático de caseína……. 15,0 g
Tioglicolato de sodio……………….. 0,5 g
O Ácido tioglicólico………………... 0,3 g
Agua c.s.p…………………………... 1.000 ml
pH después de la esterilización : 7,10,2
Disolver los componentes sólidos en el agua,
calentando suavemente, si fuera necesario, hasta
obtener una solución. Ajustar la solución con
hidróxido de sodio 1 N para obtener, después de la
esterilización, un pH de 7,1 ± 0,2. Filtrar, si fuera
necesario, transferir a recipientes apropiados y
esterilizar en autoclave empleando un
procedimiento validado. El medio debe ser
recientemente preparado o calentado en un baño
de vapor y enfriado rápidamente antes de su
empleo. No se debe recalentar.
Caldo Digerido de Caseína-Soja
(Para incubación en condiciones aeróbicas)
Digerido pancreático de caseína……. 17,0 g
Digerido papaínico de harina
de soja………………………………. 3,0 g
Glucosa Monohidrato………………. 2,5 g
Fosfato dibásico de potasio………… 2,5 g
Cloruro de sodio……………………. 5,0 g
Agua c.s.p…………………………... 1000 ml
pH después de la esterilización: 7,3 0,2
Disolver los componentes sólidos en el agua,
calentando suavemente. Enfriar la solución a
temperatura ambiente y ajustar con hidróxido de
sodio 1 N para obtener, después de la
esterilización, un pH de 7,3 ± 0,2. Filtrar, si fuera
necesario, y envasar en recipientes apropiados.
Esterilizar en autoclave empleando un
procedimiento validado.
Medios para penicilinas y cefalosporinas