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VOLUMEN I

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SOLUCIONES Y MEDIOS DE CULTIVO<br />

Soluciones<br />

Cada ensayo debe realizarse con una misma<br />

partida de reactivos, soluciones, medios y ágar.<br />

I. Solución de glucosa al 10 %<br />

D-glucosa (Dextrosa).................................100 g<br />

Agua destilada c.s.p...................................1 litro<br />

Agregar la D-glucosa a 700 ml de agua.<br />

Mezclar hasta que la solución sea límpida.<br />

Completar a volumen con agua destilada.<br />

Fraccionar en volúmenes superiores a 20 ml.<br />

Autoclavar. Conservar en heladera.<br />

II. Solución de biotina al 0,01 %<br />

D-biotina....................................................10 mg<br />

Agua destilada..........................................100 ml<br />

Calentar el agua a aproximadamente 40 °C y<br />

disolver la D-biotina. Esterilizar por filtración a<br />

través de membrana con tamaño nominal de poro<br />

no mayor de 0,45µm . Conservar en heladera.<br />

III. Solución de histidina al 0,5 %<br />

L-histidina . HCl . H 2 O............................500 mg<br />

Agua destilada..........................................100 ml<br />

Disolver la histidina en el agua destilada.<br />

Autoclavar y conservar en heladera.<br />

IV. Solución de histidina/biotina 0,5 mM<br />

D-biotina..................................................124 mg<br />

L-histidina . HCl . H 2 O..............................96 mg<br />

Agua destilada............................................1 litro<br />

Calentar el agua a aproximadamente a 40 °C y<br />

disolver la D-biotina y la L-histidina. Esterilizar<br />

por filtración a través de de membrana con tamaño<br />

nominal de poro no mayor de 0,45 µm. Conservar<br />

en heladera.<br />

V. Solución reguladora de fosfato de sodio 0,2 M<br />

pH 7,4<br />

Solución A:<br />

Fosfato dibásico de sodio anhidro…………...28,4 g<br />

Agua destilada c.s.p…………………….……1 litro<br />

Solución B:<br />

Fosfato monobásico de sodio monohidrato….27,6 g<br />

Agua destilada c.s.p…………………...……..1 litro<br />

Disolver las sales en un volumen reducido de<br />

agua y luego completar a volumen final.<br />

Para preparar la solución reguladora mezclar<br />

1 volumen de Solución A y 2 volúmenes de<br />

Solución B. Ajustar el pH a 7,4 ± 0,2. Esterilizar<br />

en autoclave. Conservar en heladera.<br />

VI. Cofactores para la mezcla S9<br />

D-glucosa-6-fosfato.....................................1,6 g<br />

Nicotinamida adenina dinucleótido<br />

fosfato (NADP)……….…………...............3,5 g<br />

Cloruro de magnesio....................................1,8 g<br />

Cloruro de potasio........................................2,7 g<br />

Fosfato dibásico de sodio anhidro..............12,8 g<br />

Fosfato monobásico de sodio<br />

monohidrato……………………………….2,8 g<br />

Agua destilada c.s.p....................................1 litro<br />

Agregar a 750 ml de agua los ingredientes uno a<br />

uno, disolviendolos por completo antes de agregar<br />

el siguiente. Completar a volumen con agua.<br />

Esterilizar por filtración a través de membrana con<br />

tamaño nominal de poro no mayor de 0,45µm..<br />

Conservar a -20 °C en envases de vidrio inactínico.<br />

VII. Solución de ampicilina al 0,8 %<br />

Ampicilina...............................................800 mg<br />

Agua destilada..........................................100 ml<br />

Disolver la ampicilina en el agua caliente<br />

(aproximadamente 40 °C). Esterilizar por filtración<br />

a través de membrana con tamaño nominal de poro<br />

no mayor de 0,45µm. Conservar en heladera en<br />

envases de vidrio inactínico durante no más de 15<br />

días.<br />

VIII. Solución de tetraciclina al 0,08 %<br />

Tetraciclina.............................................. .80 mg<br />

Agua destilada:Etanol (1:1)......................100 ml<br />

Disolver la tetraciclina en la mezcla de agua<br />

destilada : etanol (1:1). Esterilizar por filtración a<br />

través de membrana con tamaño nominal de poro<br />

no mayor de 0,45µm. Conservar en envase<br />

inactínico en heladera.<br />

IX. Solución de cristal violeta al 0,1 %<br />

Cristal violeta...........................................100 mg<br />

Agua destilada..........................................100 ml<br />

Disolver el cristal violeta en el agua. Conservar<br />

en envase inactínico en heladera.<br />

X. Soluciones madres de mutágenos control<br />

Solución de 2-aminoantraceno: 25 mg por ml en<br />

dimetil sulfóxido.<br />

Solución de Azida sódica: 10,0 mg por ml en<br />

agua destilada.<br />

Solución de 9-aminoacridina: 10 mg por ml en<br />

dimetil sulfóxido.<br />

Solución de Nitrofurantoína: 20 mg por ml en<br />

dimetil sulfóxido.<br />

Solución de Mitomicina C: 1 mg por ml en agua<br />

destilada.<br />

Solución de 4-Nitroquinolina-N-óxido: 20 mg

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